図 2. Twin-strep-tag (TS) 融合ヒト SMS の精製Strep-tag（TS）融合 SMS を哺乳類細胞（HEK293）で発現し，Strep-Tactin XT を用いて高純度に精製し，in vitro で酵素学的性質を調べた．結果及び考察① 研究基盤の構築（PLC 精製法）：SMS は 6 回膜貫通タンパク質であることから，活性を保持したまま高純度に精製し，酵素学的性質を調べるのが難しく，in vitro における SMS の酵素学的性質に不明点が多く残る 3）．そこで我々は，哺乳類細胞を用いた PLC 酵素精製系を新たに構築した 4, 5）．具体的には，ストレプトアビジンとビオチンの結合を利用したアフィニティークロマトグラフィー精製系を導入し，図 2 に示した通り，TS融合 SMS1 および SMS2 を高純度（95% 以上の純度）に精製することに成功している．② 精製 SMS1 および SMS2 は SMS 活性に加え，PC-PLC 活性を示す：精製 SMS1 の酵素学的性質を調べた結果，従来報告されている SMS 活性に加えて PC-PLC 活性を示し，さらに，SFA または一価不飽和脂肪酸（MUFA）含有 PC に対する選択性を示した．一方でPUFA のアラキドン酸（20:4, 脂肪酸の炭素数総和：不飽和度）含有 PC に対する PLC 活性は低かった 4)．興味深いことに，SMS2 も同様に PC-PLC 活性を示し，SFA/MUFA 含有 PC に対する選択性を示した（図 3）5）．以上より，SMSr に加えて，SMS1 および SMS2 も SFA-PC 選択的 PLC 活性を有し，SMS ファミリーは新奇 PLC 酵素群の 1 種であることが示唆された．― 127 ―
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