る抗体を用いたChIPシークエンス解析を行い，ゲノム上のヒストンメチル化レベルを網羅的に解析した．すると，転写開始点前後の領域で青い線で示したRK-552を作用させた時にメチル化レベルの低下が観察された．特に骨髄腫細胞の生存に関わるIRF4遺伝子の領域を拡大すると，この部位でもメチル化が低下しており(図5a)，４種類のt(4;14)陽性骨髄腫細胞株においてもIRF4発現だけが有意に低下していた(図5b)．したがって，RK-552はMMSET活性を阻害し，ヒストンメチル化抑制によるIRF4発現低下を介して増殖抑制に働く機序が明らかになった．最後に既存薬との併用効果を検証した．Isobologramを用いた解析から，プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ，カーフィルゾミブ，免疫調節薬レナリドミド，ポマリドミドの中では，ポマリドミドが最も高い相加効果を示した(未公開データ)．続いて，マウスモデルを用いて両者の併用効果の検証を進めた．骨髄腫細胞を移植したマウスに，ポマリドミド，RK-552を単独，あるいは両者を併用(combination)で治療すると，併用治療群で有意に生存期間が延長した(図6)．なお，RK-552の単独投与時も併用時も体重減少や血球減少，行動異常など顕著な副作用は見られなかった．図5. (a) DMSOまたはRK-552添加時のH3K36me2抗体によるChlPシークエンス解析．全遺伝子の転写開始点（左）とIRF4遺伝子（右）領域を示す．(b) RK-552を添加し24時間培養後の遺伝子発現変化の定量PCR測定結果．＊はDMSOに対するone-way ANOVA Student-Newman-Keuls multiple comparison testによるP<0.05．図6. 免疫不全マウス尾静脈からKMS26細胞株を移植，2週間後から，DMSO，ポマリドミド（Poma)，RK-552，または両者（combi)を，腹腔内投与した際のカプランマイヤー曲線．p値はLog Rank testによる値．― 204 ―
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