しい役割を明らかにするために本研究を行なった2)．実験方法腫瘍組織からLymphocyte Separation Solutionを使用してTILsを抽出し，FACSAriaを用いてCD3陽性T細胞をソートし，10x Single-Cell Immune Profiling Solution KitでシングルセルRNA/TCRシークエンスを行った．また，患者由来腫瘍細胞株を作成するために，収集した腫瘍細胞を10%FCS RPMIを用いて培養を継続し，増殖を認めた腫瘍を細胞株として樹立した．さらに，NFATルシフェラーゼが入ったJurkat細胞株に，TCRシークエンスデータに基づいてTCRをウイルスを用いて遺伝子導入した．これらの細胞株と腫瘍細胞との共培養を行い，TCRの腫瘍への反応性をルシフェラーゼアッセイを用いて評価した（図3a）．結果及び考察1．腫瘍浸潤TFHの中に細胞傷害性を有するTFH様細胞が存在するメラノーマ患者の外科切除病変からCD3陽性T細胞をソートしてシングルセルRNA/TCRシークエンスを行った．その結果，腫瘍浸潤T細胞は9つのクラスターに分類された (図1a)．その中のCD4陽性TFHクラスターに着目して再クラスタリングを行うと，TFHの細胞集団は細胞傷害関連遺伝子であるGZMA/BやPRF1，並びに炎症関連遺伝子であるCCL4/5やCXCR6を高発現した新規の細胞傷害性TFH様細胞の集団と，非細胞傷害性の従来型TFHのクラスターに分離できることが明らかになった（図1b）．図1. TILsのシングルセルシークエンスとTFHの再クラスタリングa) シングルセルTCR/RNAシークエンスデータの解析結果．UMAP（左），各クラスターの割合（右）を示す．b) 腫瘍浸潤 TFHの再クラスタリングの結果．2つの集団に再分類された．UMAP（上）と代表的な細胞傷害関連遺伝子と炎症関連遺伝子（下）― 164 ―
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